ERKUT ATTAR, ERGİN BENGİSU, AYHAN BİLİR, DERYA AYDIN
Gynecology Obstetrics & Reproductive Medicine - 1999;5(3):158-161
Çalışmamızın amacı insan epitelyal över kanseri hücrelerine stronsiyum fosfat kullanarak gen nakli yapmaktır. Bu yöntemle lipozomların toksik etkisinden ve viral vektörlerin neden olduğu genetik değişikliklerden kaçınılarak salt transfeksiyonun etkisini saptamak açısından bir model oluşturulmuştur. Bu model üzerinde hücre proliferasyonu üzerinde etkili olabilen diğer tedavi yöntemlerinin sinerjistik etkilerini daha, doğru bir şekilde araştırma olanağı da elde edilebilecektir. p53 geni mutant olduğu önceden bilinen insan över kanseri serisi (MDAH 2774) American Type Culture Collection'dan (ATCC) elde edilmiştir. Dondurulmuş hücreler çözülmüş ve %10 fetal bovine serum (FBS) içeren RPMI-1640. içerisinde kültürleri yapılmıştır. Stronsiyum fosfata bağlanmış sağlam (wild) p53 DNA'sı ile 37°C'de %5 CO2basınç altında 16-24 saat inkübe edilmişlerdir. Transfeksiyonun 3.günü hücreler phosphate buffered saline (PBS) ile 2 defa yıkanmışlar ve %0.2'lik gluteraldehit ile fikse edilmişlerdir. Transfeksiyonun etkinliği β-galaktosidaz aktivitesi ile araştırılmıştır. Sadece stronsiyum fosfat ile inkübe edilen hücreler negatif kontrol olarak kullanılmıştır. Transfekte edilen sağlam p53 DNA'sının protein ekspresyonu ise immunofleuroscence yapılarak araştırılmıştır. Kültüre edilmiş insan epitelyal över hücreleri stronsiyum fosfat ile, in vitro olarak başarıyla transfekte edilmişlerdir. Saptanan β-galaktosidaz aktivitesi stronsiyum fosfat ile yapılan transfeksiyonun başarısını kanıtlamıştır. Transfekte edilen p53 DNA'sının protein düzeyindeki sentezi ile immunofteuroscence ile gösterilmiştir. Sadece stronsiyum fosfat ile inkübe edilen hücrelerde ise sinyal saptanmamıştır. Çalışmamızda sağlam p53 DNA'sı literatürde ilk kez stronsiyum fosfat kullanılarak MD2774 insan över kanseri hücrelerine başarıyla transfekte edilebileceği gösterilmiştir. Bu yöntemle lipozomların toksik etkisinden ve viral vektörlerin neden olduğu genetik değişikliklerden kaçınılarak salt yapılan transfeksiyonun etkisini araştırabilme olanağı doğmuştur. Buna ek olarak, hücre proliferasyonu üzerinde etkili olabilen diğer tedavi yöntemlerinin etkinliğini daha doğru bir şekilde araştırma olanağının da elde edilebileceğini düşünmekteyiz.
