SİBEL AHİ, İCLAL MERAM, YÜKSEL ÖZDEMİR
Journal of Clinical Practice and Research - 1999;21(1):3-9
Amaç: Bu çalışmada sağlıklı kişilerin serumunda çok düşük düzeylerde bulunan (eritrosit enzim aktivitesinin 1/200 ü), arginaz aktivitesinin, duyarlı bir biçimde ölçülebilmesinin koşulları araştırılmış ve arginaz aktivitesi ölçümünde kullanılan TDMU (tiyosemikarbazid diasetil monoksim üre) yöntemi modifiye edilmiştir. Gereç ve Yöntem: Arginaz aktivite ölçümü için sağlıklı bireylerden elde edilen serum kullanılmıştır. Arginaz aktivitesi ölçümü TDMU yöntemiyle yapılmıştır. Bulgular: Ölçüm yöntemiyle maksimum aktivite elde edebilmek için ortama öninkübasyon aşamasında eklenen Mn ++ derişiminin, 5 mmol/1; ön inkübasyon süresinin, 55°C'da 8 dakika; inkübasyon süresinin ise 37° C da bir saat olması gerektiği sonucuna varılmıştır. İnkübasyon ortamında (1 ml final hacimde) 25 mmol/1 L-arginin, 40 mmol /1 karbonat tamponu (pH 9.7) ve öninkübasyona tabi tutulmuş serum bulunmaktadır. İnkübasyonun ardından serum proteınlerinin çöktürülmesi ve enzimatik tepkimenin durdurulması amacıyla ortama 1 N HC104 ilave edilerek, süpernatantta üre düzeyi saptanmıştır. Enzimin etilen diamin tetra asetik asit (EDTA) , iyodo aset amit (IAA) ve bazı amino asitler ile inhibe edildiği ve inhibisyon derecesinin, inhibitör maddelerin ortama eklendiği aşamaya bağlı olarak değiştiği gözlenmiştir. Ayrıca serum arginaz aktivitesi için, L-arginine karşı çizilen Michaelis - Menten eğrisinden enzimin Km değeri saptanmıştır. Sonuç: İnsan serum arginaz enziminin kinetik özellikleri ve optimum deney koşulları saptanmıştır.
