MURAT DOĞAN
Cumhuriyet Medical Journal - 2021;43(3):226-231
Amaç: Çeşitli genetik hastalıklarda hedefe yönelik tedavi amacıyla gen tedavisinin kullanılması gün geçtikçe daha popüler bir alan haline gelmiştir. Gen tedavisinde çeşitli taşıyıcı vektörler kullanılmaktadır. Bu çalışmada ele aldığımız plazmid ise gen taşıyıcı vektör olarak kullanılmaktadır. Bu çalışmada peGFP-N1 plazmidinin izolasyonu ve karakterizasyon çalışmalarının yapılması amaçlanmıştır. Ayrıca uygun bir gen taşıyıcı vektör olabilmesi için gerekli özellikler araştırılmıştır. Yöntem: Bu çalışmada peGFP-N1 plazmidi kullanılarak klasik yöntemle izolasyonu yapıldı. İzolasyon işleminde Escherichia coli ekspresyon ortamı olarak kullanıldı. Çalışmalarda plazmid DNA miktarının hesaplanması amacıyla plazmid DNA’ nın spektral eğri değeri hesaplandı. İzole edilmiş bakteriyel DNA’nın miktarını ve safsızlığını saptamak amacıyla spektrofotometrik yöntemler kullanıldı. Bulgular: Plazmid DNA izolasyon çalışmalarında verimin oldukça yüksek olduğu ve protein ya da RNA kaynaklı kontaminasyonların oldukça az miktarda olduğu gözlenmiştir. Hatta üçüncü izolasyon çalışması sonucunda absorbans değerleri oranının (A1/A2) 1.8 değerine çok yakın olması kontaminasyonun olmadığını göstermektedir. Sonuç: peGFP-N1 plazmidinin izolasyonu ve spektrofotometrik çalışma sonuçları bu plazmidin safsızlık ve kontaminasyon riski anlamında uygun ve kullanılabilir olduğunu göstermiştir. Yapılan bu çalışmanın sonuçlarından faydalanılarak bu plazmidin uygun bir gen taşıyıcı sistem içerisinde kullanılabileceği çalışmalara destek olacaktır.
