Ali Osman ARSLAN, Ömer Faruk ANAKÖK
Düzce Tıp Fakültesi Dergisi - 2025;27(3):279-291
Amaç: Bu çalışmanın amacı, HNRPA2B1 ve CBX3 promotörleri hariç olmak üzere, A2UCOE elemanındaki CpG zengin alt bölgelerin lentiviral sistemlerde uzun süreli transgen ekspresyonunu sürdürme yeteneğini değerlendirmektir. Bu bölgeler spleen focus-forming virüs (SFFV) promotörünün önüne klonlanmış ve P19 ile F9 hücrelerinde test edilmiştir. Gereç ve Yöntemler: Bu çalışmada, promotör içermeyen üç A2UCOE alt bölgesinin ubiquitous chromatin opening element (UCOE) aktivitesi değerlendirildi. P19 ve F9 fare embriyonal karsinom hücreleri kullanılarak, farklılaşmamış ve farklılaşmış durumlarda enhanced green fluorescent protein (eGFP) ekspresyon stabilitesi ve dayanıklılığı incelendi. CpG zengin, promotörsüz fragmanlar içeren lentiviral vektörler (LV'ler), 455UCOE (OFA1), 527UCOE (OFA2) ve 945UCOE (OFA3) hücrelere aktarıldı ve akım sitometrisiyle sürekli transkripsiyonel aktivite analiz edildi. Bulgular: Bazı vektörler eGFP ekspresyonunu sürdürürken bazıları ise hem farklılaşmamış hem de farklılaşmış durumlarda hızlı bir azalma gösterdi. Özellikle OFA1, OFA2 ve OFA3 vektörleri, SEW vektörüne benzer eğilimler göstererek zamanla eGFP ekspresyonunda belirgin azalmalar sergiledi. CBX3 kökenli fragmentlerin hiçbiri stabil ekspresyon sağlamadı, bu da UCOE aktivitesinin olmadığını düşündürdü. Ekspresyon azalma hızları, SFFV promotörlü SEW vektörü ile OFA1, OFA2 ve OFA3 içeren LV'ler arasında benzerdi. Sonuç: CpG zengin, promotör içermeyen fragmanlar fare embriyonal karsinom hücrelerinde stabil transgen ekspresyonunu destekleyememekte, bu da UCOE fonksiyonelliğinin olmadığını göstermektedir. Bulgular, gen terapisi için açık kromatinin korunmasında promotör ve düzenleyici elemanların önemini vurgulamaktadır. Gelecek çalışmalar, transgen stabilitesini artırmak için alternatif CpG zengin bölgeler veya minimal promotörleri araştırmalıdır.
