Furkan Ömer HALİS, Esra DUMAN, Özge ÖZMEN
Acta Medica Nicomedia - 2026;9(1):1-5
Amaç: Bu çalışmada, serum örneklerinden elde edilen mikroRNA'nın (miRNA) verim ve saflığını artırmak amacıyla ticari bir miRNA izolasyon kitinde uygulanan çeşitli protokol modifikasyonlarının etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Standart kit protokolü ile elde edilen düşük ribonükleik asit (RNA) verimi ve saflığı sonrasında; Proteinaz K eklenmesi (D1), liziz tamponunun 55 dereceC'de ön ısıtılması (D2), enhancer solüsyonunun faz ayrımı sonrası süpernatanta eklenmesi (D3), başlangıç serum hacminin iki katına çıkarılması (D4) ve elüsyon işleminin aynı elüat ile tekrarlanması (D5) modifikasyonları tekil ve kombine şekilde uygulanmıştır. İzolasyon başarısı NanoDrop spektrofotometresi ile ölçülen RNA konsantrasyonu ve A260/A280 oranları üzerinden değerlendirilmiştir. Bulgular: Elüsyon işleminin aynı elüat ile tekrarlanması (D5) ve liziz tamponunun ön ısıtılması (D2), örnek kalitesini koruyarak RNA veriminde belirgin artış sağlamıştır (P5: A260/A280=2,07; 26,7 ng/µL). Proteinaz K ilavesi (D1) ve enhancer modifikasyonu (D3), RNA konsantrasyonunda önemli artışlar oluşturmuş olmakla birlikte A260/A280 oranlarının ideal aralığın üzerine çıkmasına neden olmuştur. Serum hacminin artırılması (D4) ise kolon kapasitesine bağlı sınırlılıklar nedeniyle belirgin bir avantaj sağlamamıştır. Sonuç: Bu ön optimizasyon çalışmasında, elüsyon aşamasının tekrarlanması ve liziz tamponunun ön ısıtılması, serumdan miRNA izolasyonunda verim artışı sağlayan ve örnek kalitesini koruyan modifikasyonlar olarak öne çıkmıştır. Proteinaz K ve enhancer uygulamalarının ise ileri optimizasyon çalışmaları ile yüksek verim elde edilmesinde potansiyel taşıdığı düşünülmektedir.
